Estandarización de protocolos de tranformación genética en Escherichia coli y para la generación de una colección de constructos génicos

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Autores

Linda Yhiset Gómez Arias
Silvia Gómez Daza
Víctor Núñez Zarantes

Resumen




Una herramienta necesaria en la ingeniería genética de plantas son los vectores o constructos génicos que contienen genes reporteros, pues facilitan la estandarización de procedimientos de transformación genética. El objetivo de éste estudio fue evaluar protocolos de transformación genética para generar unprocedimiento que permitiera de manera rápida y con able obtener una colección base de constructosgénicos en Escherichia coli cepa DH5α y Agrobacterium tumefaciens cepas LBA 4404, EHA 105 y C58, empleando 25 vectores vectores binarios (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) que contienen los genes reporteros gfp y gus utilizando las técnicas de choque térmico y electroporación. La con rma- ción de los transformantes se realizó mediante PCR y cortes con enzimas de restricción (Eco RI y Xho I),lo que permitió veri car la presencia exitosa de éstos 25 vectores dentro de las bacterias empleadas. Losresultados indican que es necesario estandarizar los protocolos de transformación en las cepas bacterianas a utilizar porque no todas transforman con las mismas condiciones y éste trabajo puede ser un referente para la estandarización en otros laboratorios de transformación genética cuando se trabaja de manera masiva.





 

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